無菌實驗室管理規(guī)定辦法
無菌室標準【1】
無菌室是微生物檢測的重要場所與最基本的設(shè)施。它是微生物檢測質(zhì)量保證的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。因此它的設(shè)計要按國家標準-2001《潔凈廠房設(shè)計規(guī)范》、國家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《藥品檢驗所實驗室質(zhì)量管理規(guī)范(試行)》中第十八條規(guī)定執(zhí)行。微生物實驗室無菌室的施工、安裝、驗收應(yīng)按國家行業(yè)標準jgj71-1990《無菌室的施工及驗收規(guī)范》執(zhí)行。對于微生物檢測工作者和使用管理者來講,更大量的工作是進行正常管理到日常的使用。無菌室的標準要符合gmp潔凈度標準要求。
無菌室的使用管理工作
1、無菌室要符合規(guī)范要求:無菌室應(yīng)采光良好、避免潮濕、遠離廁所及污染區(qū)。面積一般不超過10m2,不小于5m2;高度不超過2.4m。由1—2個緩沖間、操作間組成(操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對),操作間和緩沖間之間應(yīng)具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋等,不應(yīng)放置培養(yǎng)箱和其他雜物;無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑平整,能耐受清洗消毒。墻壁與地面、天花板連接處應(yīng)呈凹弧形,無縫隙,不留死角。操作間內(nèi)不應(yīng)安裝下水道。
無菌操作室應(yīng)具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置,操作區(qū)潔凈度100級或放置同等級別的超凈工作臺,室內(nèi)溫度控制18—26℃,相對濕度45%—65%。緩沖間及操作室內(nèi)均應(yīng)設(shè)置能達到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置,空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于5pa,無菌室(區(qū))與室外大氣的靜壓差大于10pa。無菌室內(nèi)的照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi),室內(nèi)光照應(yīng)分布均勻,光照度不低于300l*。緩沖間和操作間所設(shè)置的紫外線殺菌燈(2—2.5w/m3),應(yīng)定期檢查輻射強度,要求在操作面上達40uw/m2。不符合要求的紫外殺菌燈應(yīng)及時更換。
2、建立使用登記制度:藥廠各個微生物檢測檢驗室都要建立使用登記制度。在登記冊中可設(shè)置以下項目內(nèi)容:如使用日期、時間、使用人、設(shè)備運行狀況、溫度、濕度、潔凈度狀態(tài)(沉降菌數(shù)、浮游菌數(shù)、塵埃粒子數(shù))、報修原因、報修結(jié)果、清潔工作(臺面、地面、墻面、天花板、傳遞窗、門把手)、消毒液名稱等。
3、建立使用標準操作規(guī)范(sop)并嚴格管理:sop內(nèi)容至少要有以下幾點:
(1)規(guī)定凈化系統(tǒng)使運轉(zhuǎn)時間要求每次實驗前應(yīng)開啟凈化系統(tǒng)使運轉(zhuǎn)至少1h以上,同時開啟凈化臺和紫外燈。
(2)物品進入無菌室基本要求:凡進入無菌室的物品必須先在第一緩沖間內(nèi)對外部表面用消毒劑消毒滅菌,再經(jīng)物流緩沖間、傳遞窗1h以上,及無菌空氣吹干后送入無菌室。注意帶纖維、易發(fā)塵物品不得帶進凈化實驗室。無菌室內(nèi)固定物品不得任意搬出。
(3)人員進入無菌室要求:實驗人員進入無菌室不得化妝、帶手表、戒指等首飾;不得吃東西、嚼口香糖。應(yīng)清潔手后進入第一緩沖間更衣,同時換上消毒隔離拖鞋,脫去外衣,用消毒液消毒雙手后戴上無菌手套,換上無菌連衣帽(不得讓頭發(fā)、衣等暴露在外面),戴上無菌口罩。然后,換或是再戴上第二副無菌手套,在進入第二緩沖間時換第二雙消毒隔離拖鞋。再經(jīng)風(fēng)淋室30s風(fēng)淋后進入無菌室。
(4)溫濕度觀察要求:觀察溫度計、濕度計上顯示的溫濕度是否在規(guī)定的范圍內(nèi),并作為實驗原始數(shù)據(jù)記錄在案。如發(fā)現(xiàn)問題應(yīng)及時尋找原因,及時報修和及時報告實驗室主管,并將報修原因和結(jié)果記錄歸檔。
(5)沉降菌落計數(shù)與浮游菌測定要求:在每次實驗同時,對操作室和層流臺做微生物沉降菌落計數(shù),將結(jié)果記錄在使用登記本上,并作為實驗環(huán)境原始數(shù)據(jù)記錄在實驗報告上。每周1次,或在無菌檢查等必要時,在每次實驗同時對操作室和凈化臺進行浮游菌測定,將結(jié)果記錄在使用登記本上,并作為實驗環(huán)境原始數(shù)據(jù)記錄在實驗報告上。
(6)消毒要求:無菌室每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液(常用消毒劑的品種有:5—20倍稀釋的碘伏水溶液、0.1%新潔爾滅溶液、1:50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸(來蘇兒)消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液(處方:對羥基苯甲酸甲酯21.5g;對羥基苯甲酸丙酯8.6g,75%乙醇10ml)等,所用的消毒劑品種與使用要進行有效性驗證方可使用,并定期更換消毒劑的品種)擦拭操作臺及可能污染的死角,方法是用無菌紗布浸漬消毒溶液清潔超凈臺的整個內(nèi)表面、頂面、及無菌室、人流、物流、緩沖間的地板、傳遞窗、門把手。清潔消毒程序應(yīng)從內(nèi)向外,從高潔凈區(qū)到低潔凈區(qū)。逐步向外退出潔凈區(qū)域。然后開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌1—2h,以殺滅存留微生物。在每次操作完畢,同樣用上述消毒溶液擦拭工作臺面,除去室內(nèi)濕氣,用紫外燈殺菌30min。
(7)其他要求:如遇停電,應(yīng)立即停止實驗,離開無菌室。關(guān)閉所有電閘。重新進入無菌室前至少開啟機房運轉(zhuǎn)1h以上。
4、潔凈度檢查的要求與方法:無菌室在消毒處理后,無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數(shù),以此來判斷無菌室是否達到規(guī)定的潔凈度,常有沉降菌和浮游菌測定方法。
(1)沉降菌檢測方法及標準:以無菌方式將3個營養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室,在操作區(qū)臺面左、中、右各放1個;打開平板蓋,在空氣中暴露30min后將平板蓋好,置32.5℃士2.5℃培養(yǎng)48h,取出檢查,3個平板上生長的菌落數(shù)平均小于1個。
(2)浮游菌檢測方法及標準:用專門的采樣器,宜采用撞擊法機制的采樣器,一般采用狹縫式或離心式采樣器,并配有流量計和定時器,嚴格按儀器說明書的要求操作并定時校檢,采樣器和培養(yǎng)皿進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌,使用的培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或藥典認可的其他培養(yǎng)基。使用時,先開動真空泵抽氣,時間不少于5min,調(diào)節(jié)流量、轉(zhuǎn)盤、轉(zhuǎn)速。關(guān)閉真空泵,放入培養(yǎng)皿,蓋上采樣器蓋子后調(diào)節(jié)縫隙高度。置采樣口采樣點后,依次開啟采樣器、真空泵,轉(zhuǎn)動定時器,根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。全部采樣結(jié)束后,將培養(yǎng)皿置32.5℃士2.5培養(yǎng)48h,取出檢查,浮游菌落數(shù)平均不得超過5個/m3。每批培養(yǎng)基應(yīng)選定3只培養(yǎng)皿做對照培養(yǎng)。
無菌操作臺面或超凈工作臺還應(yīng)定期檢測其懸浮粒子,應(yīng)達到100級(一般用塵埃粒子計數(shù)儀)檢測,并根據(jù)無菌狀況必要時置換過濾器。
5、定期進行潔凈度再驗證:定期(每季度、半年、1年)或當無菌室設(shè)施發(fā)生重大改變時,要按國家標準gb/t16292-16294-1996《醫(yī)藥工業(yè)無菌室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》進行潔凈度再驗證,以確保潔凈度符合規(guī)定,保存驗證原始記錄,定期歸檔保存,并將驗證結(jié)果記錄在無菌室使用登記冊上,作為實驗環(huán)境原始依據(jù)及趨勢分析資料。并定期對無菌室的環(huán)境檢測數(shù)據(jù)進行趨勢分析和評估,根據(jù)評估結(jié)果,了解無菌室設(shè)施環(huán)境質(zhì)量的穩(wěn)定狀況及變化趨勢,決定是否有必要修訂相應(yīng)的警戒和糾偏限度。
6、定期更換新的紫外燈管、更換凈化系統(tǒng)的初效、中效、高效頭:定期(至少每年1次)更換新的紫外燈管,以確保紫外燈管滅菌持續(xù)有效。并同時在使用登記本上做好更換記錄,定期歸檔保存。至少2年1次,或按潔凈度驗證實際情況,定期更換初效、中效、高效頭。以確保凈化系統(tǒng)的功能持續(xù)有效,并同時在使用登記本上做好更換記錄,定期歸檔保存。
7、使用過程中應(yīng)盡可能減少人員的走動或活動:平時實驗室內(nèi)應(yīng)盡可能減少人員的走動或活動,同向無菌室的門要關(guān)閉或安裝自動閉門器使其保持關(guān)閉狀態(tài)。
8、潔凈度不符合規(guī)定時立即停止使用:發(fā)現(xiàn)潔凈度不符合規(guī)定時,應(yīng)立即停止使用,尋找原因,徹底清潔、必須經(jīng)潔凈度再驗證符合規(guī)定后,才再使用,并同時將情況記錄在無菌室使用登記冊上,定期歸檔保存。
9、對進入的外來人員或維修人員進行指導(dǎo)和監(jiān)督:非微生物室檢驗人員不得進入無菌室,對必須進入的外來人員或維修人員要進行指導(dǎo)和監(jiān)督。
10、無菌室的日常管理:建立安全衛(wèi)生值日制度,一旦發(fā)現(xiàn)通風(fēng)系統(tǒng)、墻壁、天花板、地面、門窗及公用介質(zhì)系統(tǒng)等設(shè)施有損壞現(xiàn)象,要及時報告并采取相應(yīng)的修復(fù)措施,并保存記錄及時歸檔。從無菌室環(huán)境中檢測到的微生物應(yīng)能鑒別至屬或種,保留鑒別實驗原始記錄及菌種,作為無菌生產(chǎn)、無菌檢查無菌室環(huán)境質(zhì)量、消毒劑有效性評估及污染源調(diào)查的依據(jù),并且也是為無菌檢查陽性結(jié)果的調(diào)查提供第一手資料。
無菌室工作須知【2】
一、無菌室內(nèi)非請莫入,非本實驗室人員未經(jīng)批準不得在無菌室內(nèi)工作。
二、所有藥品器材均為無菌室專用,一般不得帶初無菌室,作為其他用處。
三、所有物品用后立即放回原處。
四、進入無菌室工作之前需修剪指甲,手清洗后在用1%新潔爾滅溶液洗手消毒,換鞋進入,使用超靜臺需著無菌室專用工作服并用酒精棉球擦手消毒。超靜臺每次使用后都應(yīng)仔細做好清潔整理工作。
五、衛(wèi)生值日人員要勤打掃。注意保持無菌室的相對無菌條件,經(jīng)常用新潔爾滅溶液擦洗地面、桌面、臺面和試劑廚。經(jīng)常將無菌室工作服送至洗滌室清洗消毒,使用后的鼠尸及鼠籠隨手帶出無菌室。每日為除濕機倒水。注意無菌時使用藥品、物品的消耗,及時通知工人準備,或匯報負責(zé)老師以便補充。
六、配培養(yǎng)基和其他試劑都應(yīng)有記錄,瓶子上映注明品質(zhì)、濃度、日期及配制人,使用過的培養(yǎng)基及無菌試劑應(yīng)自覺注明使用人姓名,以防止交叉污染。
七、嚴格控制細胞之間或病原之間的交叉污染,容易發(fā)生交叉污染的細胞或病毒不能在同一超凈臺內(nèi)處理。
八、扭力天平使用之后應(yīng)休止,在將讀數(shù)盤回零,托盤及天平表面擦洗干凈,藥勺也應(yīng)洗凈擦干。使用后的藥品應(yīng)將蓋擰緊,放回原處。
九、離心機使用時應(yīng)注意平衡,使用后將離心杯、橡皮套管清洗干凈,倒置晾干。
十、co2孵箱為通氣培養(yǎng)箱,應(yīng)自覺維護箱內(nèi)清潔,定期將托板、托盤換出消毒。如培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基漏出,立即用酒精棉講瓶外表面跡箱內(nèi)污跡擦拭干凈,箱內(nèi)蒸發(fā)用水威無菌蒸餾水,應(yīng)注意補充。四周水箱內(nèi)的水定期補加。co2濃度、溫度控制器等零部件請勿動,發(fā)現(xiàn)問題及時報告。
十一、組織培養(yǎng)用眼科剪刀鑷子使用后應(yīng)洗凈烘干,防止生銹。
十二、浸泡細胞培養(yǎng)板統(tǒng)一使用75%酒精(cp或ar)或醫(yī)用酒精。
